产品简介：Hoechst 33258也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，分子式为C25H24N6O ·3HCl，分子量为533.88，CASNumber 23491-45-4。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA染色。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm，Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

尚宝生物 Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。产品组成：试剂名称 规格 保存条件Hoechst33258 染色液 10ml -20℃，避光

自备材料：1. 荧光显微镜2. 蒸馏水3. 微量移液器4. PBS或生理盐水

操作步骤 (仅供参考) ：

(一)固定的组织细胞染色1. 对于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33258染色。对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品 3 倍体积以上的 Hoechst 33258 染色液，充分混匀。2. 室温放置 5～8min。3. 轻轻吸除 Hoechst 33258 染色液。4. 用无菌的 PBS 或生理盐水清洗 2～3 次，每次 3～5min。5. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。

(二)活细胞染色1. 取 96、24、6 孔板培养细胞至合适状态，按 96 孔板加入 100μl、24 孔板加入 500μl、6 孔板加入 1ml 的比例，加入适当的 Hoechst 33258 染色液，染液必须充分覆盖细胞。2. 在适宜于细胞培养的条件下培养 20～30min。3. 轻轻吸除 Hoechst 33258 染色液。4. 用无菌的 PBS 或生理盐水清洗 2～3 次，每次 3～5min。5. 进行荧光检测。

注意事项：1. Hoechst33258染色液的浓度适用于大多数常规染色的需要。2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。3. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。4. 避免反复冻融，否则容易失效。5. Hoechst 33258 对人体有一定刺激性，请注意适当防护。6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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